您当前所在的位置是:眼内炎 > 眼内炎预防

感染性眼病细菌学检查操作专家共识201

导语学习《专家共识》

本文发表于《中华眼视光学与视觉科学杂志》年1月第18卷第1期。经作者同意,转发纯属学术分享。在此感谢专家组的辛苦付出和杂志社的辛勤工作。

正确采集临床微生物检验标本,直接影响到病原菌的检出率。规范的采集、运送、保存与处理临床微生物检验标本,对于保证临床微生物检验工作质量至关重要。可靠的检验结果可以指导临床诊断治疗,为临床科学用药和控制感染提供依据,是正确、合理使用抗菌药物,医院感染监测重要的环节。

为准确检出病原菌,避免漏检及误诊,临床医护人员及实验室工作人员正确掌握临床微生物标本采集、运送、保存与处理原则和方法十分重要。为此,温州医医院/医院及中山眼科中心牵头先后于年12月在温州,年4月在广州组织国内临床微生物专家、眼科专家、医院检验科及相应实验室专家,讨论并制订了《感染性眼病细菌学检查操作专家共识》,为感染性眼病相关微生物学检查标本采集和处理提供指导。

1细菌学检查标本采集基本原则及指征

1.1基本原则

①应在病程早期、急性期、且尽可能在使用抗菌药物之前采集标本。如果已使用抗菌药物则根据临床需要酌情停药后或下次用药前采集标本。

②应根据不同的标本类型、检查目的使用适当的采集、保存、运送工具。对于各种分泌物推荐使用预先用无菌生理盐水沾湿的符合眼科临床要求的无菌拭子。采集到的标本应置于无菌容器内送检。盛装标本的容器不能使用消毒剂处理,标本中也不得添加防腐剂,以免降低病原菌的分离率。有条件的实验室应实行床边接种,无条件的实验室应将标本保存在运送培养基中送检。

③应尽可能采集到足量标本并注意无菌操作。采集与外界相通的腔道或体表标本时,如结膜囊分泌物、泪道分泌物等,应注意避免眼睑、睫毛及周围皮肤表面正常菌群的污染,以免造成病原菌与正常菌群相混淆致使临床误诊;采集房水、玻璃体等标本时,应注意严格执行无菌操作。

④应由接受过专业培训的人员进行标本采集。眼表标本包括结膜囊涂片、角膜刮片、睫毛等由经专业培训过的医生、护士、实验室人员采集,眼内标本如房水、玻璃体、异物等由培训过的手术医生采集。

⑤标本采集后应立刻送检(15min内)。由于大多数眼部标本的取材量少,建议进行床边接种和制备涂片。

⑥采集标本前,充分与病人沟通,取得病人的理解和配合。

1.2采样指征

①怀疑急性细菌性结膜炎、角膜炎、眼内炎、眼睑/眶蜂窝组织炎、睑缘炎、睑皮炎、泪腺及泪道感染疾病等。

②怀疑眼部慢性细菌性感染,但常规抗菌药物治疗无效时。

③眼外伤后怀疑细菌感染时。

④内眼手术前结膜囊细菌培养。

⑤角膜移植组织、角膜保存液、隐形眼镜及其他眼科材料、眼药等需要排除细菌污染时。

2常见标本类型采集方法及采集量

2.1结膜囊分泌物的采集

2.1.1采集器具推荐使用植绒拭子[1]、无菌生理盐水或其他符合眼科使用要求的培养基,如大豆-酪蛋白汤(TSB)等。

2.1.2采集方法

标本应由经过培训的专业人员采集;采样前使用无菌生理盐水/TSB等预先湿润拭子(注意尽量在试管壁上挤压去掉多余液体);采样时尽量不用麻醉剂,嘱患者向上注视,翻转下眼睑,暴露下方球结膜和下穹隆结膜,用无菌生理盐水/TSB等湿润过的无菌拭子由内眦部开始从内到外旋转轻拭下方结膜囊和下睑结膜表面(注意不遗漏内眦部),避免接触睫毛和睑缘,必要时使用开睑器等器具物品,采样后立即送检,或将标本放入无菌转运管中做好标记立即送往微生物学实验室[2-3]。

2.2泪道标本的采集

标本采集应由经过培训的专业人员操作;采集泪道标本时,将一拭子放置在泪小管区后方,压迫泪囊或泪小管皮肤面,用另一预先湿润过的拭子擦取泪小点处反流物。

2.3结膜/角膜刮片的采集

2.3.1采集器具

推荐使用无菌15号手术圆刀片[4]。

2.3.2结膜刮片采集

刮取前,先滴表面麻醉药滴眼液[4](尽可能使用无防腐剂的制剂),对结膜进行表面麻醉;若结膜病变处分泌物过多,可先用灭菌湿棉签去除分泌物;翻转眼睑暴露睑结膜;一手固定睑结膜,另一手持灭菌刀片,使刮刀与组织表面垂直;根据病变情况和检查需要,选择刮取部位并刮取标本;刮取标本后,滴用抗菌药物滴眼液。

2.3.3角膜刮片采集

刮取前,先滴表面麻醉药滴眼液[4](尽可能使用无防腐剂的制剂),对结膜进行表面麻醉;用手指将睑裂开大,或用开睑器撑开眼睑,若病变处分泌物过多,可先用灭菌湿棉签去除分泌物;嘱咐病人避免眼球转动;选角膜溃疡的进行缘或基底部刮取标本;刮取标本后,滴用抗菌药物滴眼液。

2.4房水采集

由培训过的眼科医生在手术室内完成;麻醉并进行常规结膜囊清洁后,用1ml无菌注射器,于角巩膜缘平行虹膜平面穿刺入前房,避开脓性液抽取房水约0.1ml。

2.5玻璃体采集

2.5.1注射器抽取法

由培训过的眼科医生在手术室内完成;麻醉并进行常规结膜囊清洁后,以22号一次性针头连接1ml无菌注射器,角巩膜缘后平坦部垂直巩膜向眼球中心方向穿刺入玻璃体腔10mm,抽取尽可能多的玻璃体样品(不少于0.2ml)。

2.5.2玻璃体切割头法[5]

由培训过的眼科医生在手术室内完成;麻醉并进行常规结膜囊清洁后,玻璃体切割头吸引管接口外接1ml无菌注射器,并手动抽吸;标准三通道切口,在向眼内灌注眼内扰动前,将已在吸引管接口外接无菌注射器的玻璃体切割头置于玻璃体腔中心区,抽取玻璃体样本不少于0.5ml(含灌注液的大体积标本需特殊处理,申请单需注明用药情况,采集最初的灌注液,不少于1.0ml)。

2.6异物采集

由培训过的眼科医生在手术室内完成,注意无菌操作。

3常见标本类型的预处理措施

3.1结膜囊分泌物

标本采集完成后,直接用无菌拭子(已有无菌生理盐水或TSB湿润过)在血琼脂平板、普通巧克力琼脂平板(需5%~10%的CO2环境)、厌氧血琼脂平板[6](必要时)表面以棉签滚动的方式涂布接种后,取洁净的玻片,将另一棉签标本制成涂片送形态学检查;若由于实际需要需将拭子接种于增菌培养基,则报告时需注明。

3.2泪道标本

泪道分泌物基础培养基接种及制作涂片方法同结膜囊分泌物。

泪道结石,推荐使用研磨器研磨后,一份用压片的方式进行形态学检查,一份以折线路径涂布接种于普通巧克力琼脂平板(需5%~10%的CO2环境),有条件的实验室增加接种巯基乙酸盐肉汤进行厌氧培养[7]。

3.3结膜及角膜刮片

用刀片采集尽可能多的标本后即时接种,或将刮取物置于转运试管(带转运拭子和运送培养基),并确保标本浸入液体转运介质中[4]。

经研磨或充分震荡后,实验室人员将标本接种于血琼脂平板、普通巧克力琼脂平板以及制作涂片做形态学检查(最好是标本直接涂片),必要时增加厌氧培养。

3.4房水及玻璃体液

常规方法:手术采集房水(0.1~0.2ml)/玻璃体液(0.5ml),量尽可能多,分别用注射器加0.05/0.2ml标本至液体增菌培养基(专用培养基或儿童血培养瓶)[5,8],0.05/0.2ml标本至真菌培养基内(标本量足够时建议增加厌氧培养),剩余标本直接滴于洁净玻片上,制成涂片,尽快送至实验室。

3.5异物

异物取出后,放入1ml液体增菌培养液充分振摇1min,异物交还临床,培养液分别接种血琼脂平板、普通巧克力琼脂平板以及制作涂片做形态学检查。

3.6刮片及分泌物涂片制作要求

标本采集完成后,用无菌拭子或拔除针头后的注射器在洁净带磨砂玻片中间位置,自内而外涂成直径1.0~1.5cm的近圆形,制成两张涂片,做好标记,待涂片自然干燥后推荐用95%乙醇固定5min或滴加10%甲醇直接固定[5,9]。

4标本运送

标本采集后尽快送至实验室。特殊情况下,标本无法送达实验室时,应使用运送培养基,置于室温保存,不可冷藏或冷冻,且不应超过12h。运送过程需符合生物安全要求。

5标本常规检查项目及报告方式

5.1染色方法的选择

实验室接到标本后,根据不同需要选择不同的染色方法,常规推荐革兰染色和瑞氏吉姆萨染色,必要时增加抗酸染色等(可在前两种染色基础上直接进行抗酸染色),也可根据临床医师的建议选择其他特殊染色方法。

5.2涂片及刮片镜检报告格式

5.2.1病原学报告:细菌:找到革兰阳/阴性球/杆菌,要描述排列方式,细菌与白细胞及吞噬细胞的关系,如吞噬等;真菌:要描述菌丝及孢子形态,详见真菌检验规范;观察全部涂片区未找到细菌,则报告未找到。

5.2.2细胞学报告根据瑞氏吉姆萨染色结果,报告视野中白细胞/上皮细胞/单核细胞/巨噬细胞等种类,数量可按照“某一类细胞数/HP”,特殊情况下白细胞可以按照中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞等分别报告。

5.2.3报告形式:常规使用文字描述报告;有条件的单位,建议发图文报告,图片采用油镜(×)下形态,1h内报告。

5.3细菌培养实验室内的操作及要求

5.3.1标本采集后应尽快接种于血琼脂平板和普通巧克力琼脂平板并及时送到微生物实验室。实验室收到标本后,血琼脂平板置普通孵箱35~37℃培养,普通巧克力琼脂平板置5%~10%CO2孵箱培养48h(结果阴性但临床高度怀疑感染的标本需要再继续培养24h[2],最长不超过5天[3,6]),至少24h观察1次,必要时12h观察1次,如果有菌落生长则结合标本涂片结果进行分析后,进一步完成细菌鉴定和药敏试验。厌氧菌培养按厌氧菌培养规范处理。

5.3.2接种于增菌液(手工法建议用双相瓶,仪器法用儿童瓶)的标本,置于35~37℃恒温培养箱培养,每天观察(至少3次)或直接作为血培养标本上全自动血培养系统,一旦发现阳性,立即无菌抽取瓶中培养液转种血琼脂平板和普通巧克力琼脂平板[3,6],血琼脂平板置普通孵箱35~37℃培养,普通巧克力琼脂平板置5%~10%CO2环境孵箱中培养,同时做涂片,结合标本涂片结果进行分析后,第一时间将涂片结果作为一级报告发送。然后后续的生长情况、生化鉴定反应及药敏结果等给予完整报告。如果手工法培养7天后,仪器法培养5天后未见生长,则报告阴性结果,建议阴性报告当天取培养物直接涂片行革兰染色并盲传血平板和巧克力平板,如盲传阳性则补发报告单,并和临床做好沟通。

5.3.3厌氧菌培养标本接种厌氧平板置厌氧环境中35~37℃培养至少48h[10],无菌生长5d[11],必要时可延长至7d[12]报告,具体根据厌氧菌操作规程进行。

6病原诊断报告

6.1分泌物、结石、角膜刮片等标本

6.1.1阳性结果有#种菌生长,##细菌(注明鉴定方法,如手工、仪器,及鉴定结果的分值,并保存原始记录),结合标本涂片结果进行分析后报告可疑的致病菌并给出建议,同时报告药敏结果。

6.1.2阴性结果:培养48h(自接种到固体培养基开始计时),未见致病菌生长。

6.2房水、玻璃体、异物等标本

6.2.1阳性结果有#种菌生长,##细菌,结合标本涂片结果进行分析后报告可疑的致病菌,同时报告药敏结果。

6.2.2阴性结果直接培养48h(自接种到固体培养基开始计时),增菌培养手工法7d,仪器法5d,报无细菌生长。如果涂片找到细菌,培养未见细菌生长,应备注提示。

6.3怀疑分枝杆菌感染的标本建议按照分枝杆菌的常规方法处理。

6.4危急值报告,包括房水、玻璃体、异物及其他眼内容物等培养阳性结果,按危急值报告程序处理。

6.5拒收标本标准采集量过少;标本明显污染;申请单填写不全等。如有特殊情况,临床要求出结果的,则需添加备注“已通知临床,结果仅供参考”。

7生物安全

所有标本均应视为具有潜在生物危害的标本,必须按照标准防护措施处理标本。

另附说明:

1.本规范暂以试用版发布,并在临床试用1年后集中反馈意见,并根据实际情况修改后再正式发布。

2.本规范仅供医务人员在临床工作中参考,不具备法律功效,其中观点及操作要点也需要随着各种技术的进步不断完善。

专家组成员

(按姓氏汉语拼音排列):

曹文俊复旦大医院

医院

陈蔚温州医医院

康玉国(山西省医院)

李向阳(温州医院)

李雅军(天津市医院)

梁庆丰(首都医科医院)

梁远波(温州医医院)

刘李英(福州医院)

鹿秀海(山东省医院)

瞿佳(温州医医院)

马文江(天津医科大学眼科中心)

宋宗明(温州医医院)

孙声桃(河南省立医院)

吴开力(中山眼科中心)

许芬芳(厦门大学附属厦门眼科中心)

俞阿勇(温州医医院)

张建英(宁波市医院)

赵振全(温州医医院)

郑美琴(温州医医院)(执笔人)

(本文编辑:陈众,审核:郑美琴)

赞赏

人赞赏









































白癜风哪治的好
白癜风是否传染用什么药


转载请注明:http://www.fkdgq.com/ynyyf/1269.html

  • 上一篇文章:
  • 下一篇文章: